產(chǎn)品及特點:
1. 即開即用,用戶只需要提供DNA模板。
2. 引物經(jīng)過精心優(yōu)化,專一性強,只擴增松樹脂潰瘍病菌,與其他病原沒有交叉反應。
3. 提供陽性對照,便于區(qū)分假陰性樣品。
4. PCR mix 中含上樣染料,PCR后可以直接上樣電泳。
5. 本試劑盒足夠做40μL體系的PCR 50次,但只能用于科研。
規(guī)格及成分:
編號
|
成分
|
規(guī)格
|
試劑一
|
PCR MagicMix 3.0
|
1 mL(紅蓋)
|
試劑二
|
超純水
|
1 mL(亮黃色)
|
試劑三
|
松樹脂潰瘍病菌 PCR 引物混合液
|
100 μL(白蓋)
|
試劑四
|
松樹脂潰瘍病菌 PCR 陽性對照(1×10E8 /μL)
|
50 μL(黃蓋)
|
試劑五
|
使用手冊
|
1 份
|
運輸及保存:
低溫運輸,-20℃保存,保存期限為一年。陽性對照需要單獨放置,不要污染其他試劑。
自備試劑:
樣品 DNA。
使用方法:
一、樣品 DNA 的制備:
1. 用自選方法純化N+2個樣品的DNA,本試劑盒跟市場上大多數(shù)核酸提取試劑盒兼容??梢赃x用本公司柱式病毒 DNAout。
2. 如果有N個樣品,則需要做N+2個提取,包括一個樣品制備陽性對照和一個樣品制備陰性對照。樣品制備陽性對照是在適量水(取決于試劑盒要求的樣品起始量)中加 10μL 松樹脂潰瘍病菌 PCR 陽性對照的 1000 倍稀釋液而得,樣品制備陰性對照是直接用水。提取結束后得到模板 DNA 放冰上待用。
二、設置 PCR 反應(40μL 體系):
3. 對N+2個樣品,在PCR時需要增加一個PCR陽性對照和一個PCR陰性對照,故需要設置N+4個反應。在N+4個PCR管中分別加入下列成分:
成份
|
N+2 個樣品管
|
PCR 陰性對照
|
PCR陽性對照
|
PCR Magic Mix 3.0
|
各 20μL
|
20μL
|
20μL
|
松樹脂潰瘍病菌PCR 引物混合液
|
各2μL
|
2μL
|
2μL
|
N+2個樣品DNA模板
|
各18μL
|
--
|
--
|
PCR 陰性對照(水)
|
--
|
18μL
|
--
|
PCR 陽性對照(松樹脂潰瘍病菌PCR陽性對照1000倍稀釋液)
|
--
|
--
|
18μL
|
4. 按下表設置 PCR 反應:
過程
|
溫度
|
時間
|
預變性
|
95℃
|
5 min
|
PCR 反應(35 個循環(huán))
|
95℃
|
30 sec
|
55℃
|
30 sec
|
72℃
|
40 sec
|
延伸
|
72℃
|
7 min
|
松樹脂潰瘍病菌PCR試劑盒
三、電泳檢測:
5. 取 10-20 μL PCR 產(chǎn)物。電泳檢測 PCR 產(chǎn)物。本產(chǎn)品提供的 PCR Mix 在 擴增結束后可以直接上樣,不需要另外再加 loading buffer。PCR 產(chǎn)物陽 性對照必須有 551bp 大小的條帶出現(xiàn),陰性對照必須無任何擴增,否則實 驗無效。對沒有擴增產(chǎn)物的樣品,可以稀釋 10 倍后重復 PCR 擴增以排除 PCR 抑制劑的感染。