產(chǎn)品名稱：永生化人肥大細(xì)胞系 ; LUVA

細(xì)胞名稱

永生化人肥大細(xì)胞系 ; LUVA

細(xì)胞品牌

通蔚生物

細(xì)胞規(guī)格

1×10?cells/T25培養(yǎng)瓶

細(xì)胞英文

Laboratory of University of VirginiA

基本形態(tài)

多形型

傳代方法

1 : 2傳代

培養(yǎng)條件

氣相：空氣，95%；CO2,5% ；溫度：37℃

生長特性

 貼壁懸浮混合生長

消化時間

1-2分鐘

凍存條件

無血清細(xì)胞凍存液

完全培養(yǎng)基

 SFM/500ml  , L-glutamine(2MM final) , 5ml Pen Strep(10000U/ml)     

培養(yǎng)環(huán)境

37℃，5%CO2，95%AIR

供應(yīng)范圍

僅供科研使用

特征特性

LUVA細(xì)胞具有異染色質(zhì)顆粒，對類胰蛋白酶、組織蛋白酶G和羧肽酶A3有免疫反應(yīng)。它們表達(dá)編碼FcεRI、c-kit、糜酶、類胰蛋白酶、組氨酸脫羧酶、羧肽酶A3和半胱氨酸白三烯1型受體的轉(zhuǎn)錄本。流式細(xì)胞術(shù)證實FcεRI、c-kit和FcγRII表達(dá)均勻。FcεRI交聯(lián)誘導(dǎo)β-己糖胺酶、前列腺素D（2）、血栓素A（2）和巨噬細(xì)胞炎性蛋白1β的釋放

注意事項

     懸浮細(xì)胞離心收集 , 貼壁細(xì)胞消化處理

到貨處理

1、收到細(xì)胞后，檢查外包裝情況和箱內(nèi)是否還有干冰。如有外包裝破損干冰已完全揮發(fā)等問題，請即時聯(lián)系。

2、將細(xì)胞取出轉(zhuǎn)移至液氮或－80 度冰箱保存，建議盡早復(fù)蘇。

3、復(fù)蘇一管如有活性狀態(tài)問題及時與我們聯(lián)系，會有技術(shù)人員與您溝通指導(dǎo)后再復(fù)蘇二管。
特別說明：未與我方聯(lián)系擅自復(fù)蘇二管出現(xiàn)問題不予售后。

細(xì)胞復(fù)蘇

1、從液氮中取出細(xì)胞凍存管（注意：佩戴防爆管面具），快速將其置入 37℃水浴中解凍，直至凍存管中無結(jié)晶，然后用 75%的酒精擦拭凍存管外壁。

2、將凍存管中的細(xì)胞移至含 5ml 完全培養(yǎng)基的 15ml 離心管中，1000rpm 離心 5min。

3、棄上清，沉淀用 5ml 完全培養(yǎng)基重懸，接種 T25 培養(yǎng)瓶，于 37℃,5%CO2 細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

4、隔天，換用新鮮完全培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。

細(xì)胞傳代

1、細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的 80%面積時，棄 T25 培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液，用 PBS 清洗細(xì)胞一次。

2、添加 0.25%胰蛋白酶消化液約 1ml 至培養(yǎng)瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細(xì)胞回縮變圓后加入 5ml 完全培養(yǎng)液終止消化，再輕輕吹打細(xì)胞使之脫落，然后將懸液轉(zhuǎn)移至 15ml 離心管中，1000rpm 離心 5min。

3、棄上清，沉淀細(xì)胞用 1-2ml 完全培養(yǎng)基重懸，然后按 1:2 比例進(jìn)行分瓶傳代（兩個 T25），補(bǔ)充新的完全培養(yǎng)基至 5-8ml/瓶，放入 37℃,5%CO2 細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

細(xì)胞凍存

1、細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的 80%面積時，棄 T25 培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液，用 PBS 清洗細(xì)胞一次。

2、添加 0.25%胰蛋白酶消化液約 1ml 至培養(yǎng)瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細(xì)胞回縮變圓后加入 5ml 完全培養(yǎng)液終止消化，再輕輕吹打細(xì)胞使之脫落，然后將懸液轉(zhuǎn)移至 15ml 離心管中，1000rpm 離心 5min。

3、棄上清，沉淀細(xì)胞加入 1ml/支的無血清凍存液，混勻后加入凍存管中。（如：凍一支，加入 1ml 無血清凍存液）

4、將凍存細(xì)胞直接放入－80℃冰箱即可；如后期要將細(xì)胞轉(zhuǎn)入液氮罐中，需在-80℃冰箱存放 24 小時以上。

T25細(xì)胞到貨處理

觀察

1、收到細(xì)胞后，請及時核對培養(yǎng)瓶上標(biāo)注的細(xì)胞名稱是否與訂購的細(xì)胞名稱一致以及培養(yǎng)瓶是否有破損或漏液等異常情況。

處理

1、75%酒精棉球擦拭 T25 細(xì)胞培養(yǎng)瓶外部。
2、顯微鏡觀察細(xì)胞生長情況，并對細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照保存（40x,100x,200x 各一張）前三天照片為重要售后依據(jù)，不提供照片默認(rèn)收到狀態(tài)良好。

3、不要打開培養(yǎng)瓶蓋，將細(xì)胞放入 37 度培養(yǎng)箱中靜置 3-4 小時后再做處理，以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。

4、收到細(xì)胞后，及時查看說明書是貼壁細(xì)胞還是懸浮細(xì)胞形態(tài)，并按常規(guī)貼壁或懸浮細(xì)胞的傳代方法操作。

半貼壁、半懸浮細(xì)胞處理方法

1、該細(xì)胞是半貼壁半懸浮生長，懸浮細(xì)胞用離心管收集細(xì)胞懸液，1000rpm 離心 5min，收集上清（后期對比培養(yǎng)使用）。

2、當(dāng)未超過 80%匯合度時，將離心收集到的懸浮細(xì)胞沉淀加入 5ml 完全培養(yǎng)基重懸，加入原培養(yǎng)瓶中，放入 37℃、5%CO2 孵箱培養(yǎng)。

3、超過 80%匯合度時，將貼壁細(xì)胞根據(jù)貼壁細(xì)胞傳代方法消化、離心、收集；將懸浮細(xì)胞和貼壁細(xì)胞的沉淀用 1-2ml 完全培養(yǎng)基重懸收集到一起，混勻后，按 1:2 進(jìn)行分瓶傳代（2個 T25）。（傳代時建議一瓶用原瓶里面的完全培養(yǎng)基，另外一瓶用自己配的完全培養(yǎng)基，進(jìn)行對比培養(yǎng)。）

（注意：如收到密封培養(yǎng)瓶，處理完后放入培養(yǎng)箱培養(yǎng)時要將培養(yǎng)瓶蓋子擰松)

細(xì)胞予重發(fā)

1. 細(xì)胞運(yùn)輸中遭遇的各種問題，細(xì)胞丟失瓶身破損、培養(yǎng)液嚴(yán)重漏液等，重發(fā)。

2. 收到細(xì)胞未開封，如出現(xiàn)污染狀況，重發(fā)。

3. 收到細(xì)胞3天內(nèi)，發(fā)現(xiàn)污染問題，經(jīng)核實后，重發(fā)。

4. 常溫發(fā)貨細(xì)胞靜置2小時后，干冰凍存發(fā)貨細(xì)胞復(fù)蘇2天后，絕大多數(shù)細(xì)胞未存活，經(jīng)核實后，重發(fā)。

5. 常溫發(fā)貨的細(xì)胞靜置22小時且未開封或干冰凍存發(fā)貨的細(xì)胞復(fù)蘇2天后，出現(xiàn)污染經(jīng)核實后，重發(fā)。

6. 細(xì)胞活性問題在收到產(chǎn)品3天內(nèi)提出真實實驗結(jié)果，用臺盼藍(lán)染色法鑒定細(xì)胞活力，經(jīng)核實后，重發(fā)。

細(xì)胞不予重發(fā)

1. 客戶操作造成細(xì)胞污染，不重發(fā)。

2. 客戶嚴(yán)重操作失誤致細(xì)胞狀態(tài)不好，不重發(fā)。

3. 非我們推薦細(xì)胞培養(yǎng)體系致的細(xì)胞狀態(tài)不好，不重發(fā)。

4. 細(xì)胞狀態(tài)不好，未提供真實清晰的培養(yǎng)前3天的細(xì)胞狀態(tài)照片，不重發(fā)。

5. 細(xì)胞培養(yǎng)時經(jīng)其它處理導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問題的，不重發(fā)。

6. 收到細(xì)胞發(fā)現(xiàn)問題與客服人員溝通的時間證明大于3天的，不重發(fā)。