基本信息
細(xì)胞名稱 |
|
細(xì)胞品牌 |
通蔚生物 |
細(xì)胞規(guī)格 |
1×10?cells/T25培養(yǎng)瓶 |
細(xì)胞英文 |
EL4 ; EL-4 ; EL 4 ; E.L.4 |
基本形態(tài) |
淋-巴母細(xì)胞樣 |
傳代方法 |
1:2 |
培養(yǎng)條件 |
氣相:空氣,95%;CO2,5% ;溫度:37℃ |
生長(zhǎng)特性 |
懸浮生長(zhǎng) |
凍存條件 |
無血清細(xì)胞凍存液 |
完全培養(yǎng)基 |
DMEM(高糖)+10%FBS EL4完全培養(yǎng)基 |
培養(yǎng)環(huán)境 |
37℃,5%CO2,95%AIR |
供應(yīng)范圍 |
僅供科研使用 |
細(xì)胞特征 |
EL4是從用9,10-二甲基-1,2-苯并蒽在C57BL小鼠中誘導(dǎo)的淋-巴瘤中建立的,能抗0.1 mM 氫化可的松,對(duì)20 mcg/ml PHA敏感。 還有一個(gè)亞株(EL4.IL-2, ATCC TIB-181)可以生成高水平的IL-2,檢測(cè)表明肢骨發(fā)育畸形病毒(鼠痘)陰性。 |
注意事項(xiàng) |
該細(xì)胞為懸浮細(xì)胞 , 請(qǐng)注意離心收集 , 請(qǐng)勿直接倒掉細(xì)胞培養(yǎng)液 |
細(xì)胞操作
到貨處理 |
1、收到細(xì)胞后,檢查外包裝情況和箱內(nèi)是否還有干冰。如有外包裝破損干冰已完全揮發(fā)等問題,請(qǐng)即時(shí)聯(lián)系。 2、將細(xì)胞取出轉(zhuǎn)移至液氮或-80 度冰箱保存,建議盡早復(fù)蘇。
3、復(fù)蘇一管如有活性狀態(tài)問題及時(shí)與我們聯(lián)系,會(huì)有技術(shù)人員與您溝通指導(dǎo)后再?gòu)?fù)蘇二管。 |
細(xì)胞復(fù)蘇 |
1、從液氮中取出細(xì)胞凍存管(注意:佩戴防爆管面具),快速將其置入 37℃水浴中解凍,直至凍存管中無結(jié)晶,然后用 75%的酒精擦拭凍存管外壁。 2、將凍存管中的細(xì)胞移至含 5ml 完全培養(yǎng)基的 15ml 離心管中,1000rpm 離心 5min。 3、棄上清,沉淀用 5ml 完全培養(yǎng)基重懸,接種 T25 培養(yǎng)瓶,于 37℃,5%CO2 細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。 4、隔天,換用新鮮完全培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。 |
細(xì)胞傳代 |
1、方法一:收集細(xì)胞懸液,至離心管中 1000rpm 離心 5min,棄上清,加 1-2mL 完全培養(yǎng)基重懸,按 1 :2 的比例進(jìn)行分瓶傳代,補(bǔ)充新的完全培養(yǎng)基至 5-8ml/瓶,放入 37℃,5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。 2、方法二:可選用半換液方式,將 T25 瓶子豎起來,輕輕拍打兩下,在培養(yǎng)箱靜置 10 分鐘,肉眼可見大部分細(xì)胞沉在底部,輕輕吸去半數(shù)培養(yǎng)基后,將剩余細(xì)胞懸起,將細(xì)胞懸液按 1:2 比例分瓶,補(bǔ)充新的完全培養(yǎng)基至 5-8ml/瓶,放入 37℃,5%CO2 細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。 |
細(xì)胞凍存 |
1、細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)瓶的 80%面積時(shí),棄 T25 培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液,用 PBS 清洗細(xì)胞一次。 2、添加 0.25%胰蛋白酶消化液約 1ml 至培養(yǎng)瓶中,倒置顯微鏡下觀察,待細(xì)胞回縮變圓后加入 5ml 完全培養(yǎng)液終止消化,再輕輕吹打細(xì)胞使之脫落,然后將懸液轉(zhuǎn)移至 15ml 離心管中,1000rpm 離心 5min。 3、棄上清,沉淀細(xì)胞加入 1ml/支的無血清凍存液,混勻后加入凍存管中。(如:凍一支,加入 1ml 無血清凍存液) 4、將凍存細(xì)胞直接放入-80℃冰箱即可;如后期要將細(xì)胞轉(zhuǎn)入液氮罐中,需在-80℃冰箱存放 24 小時(shí)以上。 |
T25細(xì)胞到貨處理 |
|
觀察 |
1、收到細(xì)胞后,請(qǐng)及時(shí)核對(duì)培養(yǎng)瓶上標(biāo)注的細(xì)胞名稱是否與訂購(gòu)的細(xì)胞名稱一致以及培養(yǎng)瓶是否有破損或漏液等異常情況。 |
處理 |
1、75%酒精棉球擦拭 T25 細(xì)胞培養(yǎng)瓶外部。 3、不要打開培養(yǎng)瓶蓋,將細(xì)胞放入 37 度培養(yǎng)箱中靜置 3-4 小時(shí)后再做處理,以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。 4、收到細(xì)胞后,及時(shí)查看說明書是貼壁細(xì)胞還是懸浮細(xì)胞形態(tài),并按常規(guī)貼壁或懸浮細(xì)胞的傳代方法操作。 |
細(xì)胞注意事項(xiàng) |
1、將 T25 培養(yǎng)瓶中的懸液收集至離心管中 1000rpm 離心 5min,收集上清(后期對(duì)比培養(yǎng)使用),加 1-2ml 完全培養(yǎng)基重懸,按 1:2 比例進(jìn)行分瓶傳代(兩個(gè) T25),補(bǔ)充新的完全培養(yǎng)基至 5-8ml/瓶,放入 37℃,5%CO2 細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。(傳代時(shí)建議一瓶用原瓶里面的完全培養(yǎng)基,另外一瓶用自己配的完全培養(yǎng)基,進(jìn)行對(duì)比培養(yǎng)。)(注意:如收到密封培養(yǎng)瓶,處理完后放入培養(yǎng)箱培養(yǎng)時(shí)要將培養(yǎng)瓶蓋子擰松) |
售后服務(wù)
細(xì)胞予重發(fā) |
1. 細(xì)胞運(yùn)輸中遭遇的各種問題,細(xì)胞丟失瓶身破損、培養(yǎng)液嚴(yán)重漏液等,重發(fā)。 |
2. 收到細(xì)胞未開封,如出現(xiàn)污染狀況,重發(fā)。 |
3. 收到細(xì)胞3天內(nèi),發(fā)現(xiàn)污染問題,經(jīng)核實(shí)后,重發(fā)。 |
4. 常溫發(fā)貨細(xì)胞靜置2小時(shí)后,干冰凍存發(fā)貨細(xì)胞復(fù)蘇2天后,絕大多數(shù)細(xì)胞未存活,經(jīng)核實(shí)后,重發(fā)。 |
5. 常溫發(fā)貨的細(xì)胞靜置22小時(shí)且未開封或干冰凍存發(fā)貨的細(xì)胞復(fù)蘇2天后,出現(xiàn)污染經(jīng)核實(shí)后,重發(fā)。 |
6. 細(xì)胞活性問題在收到產(chǎn)品3天內(nèi)提出真實(shí)實(shí)驗(yàn)結(jié)果,用臺(tái)盼藍(lán)染色法鑒定細(xì)胞活力,經(jīng)核實(shí)后,重發(fā)。 |
細(xì)胞不予重發(fā) |
1. 客戶操作造成細(xì)胞污染,不重發(fā)。 |
2. 客戶嚴(yán)重操作失誤致細(xì)胞狀態(tài)不好,不重發(fā)。 |
3. 非我們推薦細(xì)胞培養(yǎng)體系致的細(xì)胞狀態(tài)不好,不重發(fā)。 |
4. 細(xì)胞狀態(tài)不好,未提供真實(shí)清晰的培養(yǎng)前3天的細(xì)胞狀態(tài)照片,不重發(fā)。 |
5. 細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)經(jīng)其它處理導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問題的,不重發(fā)。 |
6. 收到細(xì)胞發(fā)現(xiàn)問題與客服人員溝通的時(shí)間證明大于3天的,不重發(fā)。 |