口腔拭子基因組DNA提取試劑盒
產(chǎn)品及特點
本試劑盒適用于口腔拭子基因組 DNA 提取。試劑盒采用了獨特的細(xì)胞裂解體系，細(xì)胞在裂解、蛋白變性降解、核酸/蛋白分離后，核酸特異吸附結(jié)合到硅膠膜上，通過簡單漂洗去除雜質(zhì)，并快速純化得到基因組 DNA。使用本試劑盒得到的基因組DNA無蛋白、核酸酶污染，能滿足基因檢測、組織分型等所需要的 DNA 量，也可滿足PCR、酶切和雜交等分子生物學(xué)實驗。
它具有下列特點：
1. 簡便快速：可快速從口腔拭子中獲得高純度的基因組DNA；
2. an全：無需有機(jī)溶劑抽提，使用an全；
3. 穩(wěn)定：所得 DNA 純度高，重復(fù)性好，方便下游應(yīng)用。
成分規(guī)格
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Buffer GTL
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12ml
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24ml
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48ml
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Buffer GL
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12ml
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24ml
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48ml
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Buffer W1（concentrate）
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13ml
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26ml
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52ml
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Buffer W2（concentrate）
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15ml
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30ml
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60ml
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Buffer EB
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10ml
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10ml
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30ml
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Proteinase K
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1ml
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2×1ml
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4×1ml
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Spin Column with Collection Tubes
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50套
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100套
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200套
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Proteinase K 于-20℃ ，其他組分室溫（15 - 25℃），可保存12 個月
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本產(chǎn)品僅供科研使用，不得用于其它用途
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5.使用方法
自備試劑
無水乙醇、RNase A（可選）。
（取樣方式：使用棉簽在面頰內(nèi)擦拭 10 次，為保證樣本不被食物或飲料污染，取樣前30 分鐘內(nèi)請勿進(jìn)食或飲水。）
1. 材料處理：將在面頰內(nèi)擦拭過的棉簽用剪刀將棉簽部分從其桿上剪下，置于2ml 離心管中，加入 200 μl Buffer GTL。
（注 意：如果需要去除 RNA，可加入 4 μl RNase A（100 mg/ml）溶液），振蕩混勻，室溫放置5min）
2. 加入 20 μl Proteinase K 溶液，渦旋 10 sec 混勻。
3. 加入 200 μl Buffer GL，充分顛倒混勻，70℃水浴 10 min。此時溶液應(yīng)變清亮，簡短離心以去除管蓋內(nèi)壁的液滴，然后擠壓去除拭子，將盡可能多的裂解液轉(zhuǎn)移至新的離心管中。
注 意：
a. 加入緩沖液 GL 時可能會產(chǎn)生白色沉淀，一般 70℃水浴時會消失，不會影響后續(xù)實驗。如溶液未變清亮，說明細(xì)胞裂解不徹底，可能導(dǎo)致提取 DNA 量少和提取出的DNA 不純。b. 如果由于拭子上細(xì)胞數(shù)少導(dǎo)致提取的基因組 DNA 少于 1 μg，可以在添加緩沖液 GL 的同時添加Carrier RNA（客戶自備）
4. 加 500 μl 無水乙醇，充分顛倒混勻，簡短離心以去除管蓋內(nèi)壁的液滴。
(注 意：加入無水乙醇后可能會出現(xiàn)絮狀沉淀，但不影響 DNA 提取)
5. 將上一步所得溶液和絮狀沉淀分批加入一個吸附柱中，10,000 rpm離心30 sec，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱放回收集管中。
6. 向吸附柱內(nèi)加入 500 μl Buffer W1，室溫 10,000 rpm 離心30 sec，棄收集管中廢液。（注 意：Buffer W1 按要求加入無水乙醇，用后及時蓋緊，以防乙醇揮發(fā)）
7. 向吸附柱內(nèi)加入 500 μl Buffer W2，室溫 10,000 rpm 離心30 sec，棄收集管中廢液。（注 意：Buffer W2 按要求加入無水乙醇，用后及時蓋緊，以防乙醇揮發(fā)）
8. 重復(fù)步驟 7 一次。
9. 室溫 12,000 rpm 離心 2 min，甩干殘留液體。（注意：此步不能省略，否則殘留乙醇會影響基因組 DNA 的后續(xù)使用）
10. 將離心吸附柱置于一個新的 1.5 ml 塑料離心管（自備）中，加入30 - 50 μl Buffer EB，室溫放置 2 min。10,000 rpm 離心 2 min，離心管底溶液即基因組DNA。
（注 意：為增加洗脫效率，可將洗脫液在60℃預(yù)熱。如需使用去離子水洗脫，可用NaOH調(diào)整其pH值在 7.0 - 8.5之間，為了增加基因組 DNA 回收率，可將得到的溶液重新加入到離心管中，室溫放置2 min，再次離心收集）
注意事項
1. 如 Buffer GTL 和 Buffer GL 產(chǎn)生沉淀，可在 56℃水浴溶解；
2. 樣品應(yīng)避免反復(fù)凍融，否則會導(dǎo)致提取的 DNA 片段小，提取量下降；
3. 所有離心步驟均為臺式離心機(jī)，室溫下操作；
4. 按要求在 Buffer W1/W2 中加入無水乙醇。
