產(chǎn)品詳情
簡單介紹：
2×Taq PCR MasterMix(不含染料)本產(chǎn)品包含 Taq DNA 聚合酶、dNTPs、MgCl2、反應(yīng)緩沖液、PCR 反應(yīng)增強(qiáng)劑、優(yōu)化劑以及穩(wěn)定劑，濃度為 2×。具有快速簡便、靈敏度高、特異性強(qiáng)、穩(wěn)定性好等優(yōu)點(diǎn)，可大限度地減少人為誤差。
詳情介紹：
產(chǎn)品特點(diǎn)
本產(chǎn)品包含 Taq DNA 聚合酶、dNTPs、MgCl2、反應(yīng)緩沖液、PCR 反應(yīng)增強(qiáng)劑、優(yōu)化劑以及穩(wěn)定劑，濃度為 2×。具有快速簡便、靈敏度高、特異性強(qiáng)、穩(wěn)定性好等優(yōu)點(diǎn)，可大限度地減少人為誤差。
它具有下列特點(diǎn)：
它具有下列特點(diǎn)：
1. 顯著提高 PCR 的特異性和靈敏度；
2. 多次凍融或長期放于 4℃不會影響活性；
3. 應(yīng)用簡便，減少誤差，降低了對 PCR 條件的要求；
4. 不含染料的 MasterMix 產(chǎn)品在 PCR 結(jié)束后需混合適量的上樣緩沖液再上樣電泳，含染料的 MasterMix 產(chǎn)品在 PCR 結(jié)束后可以直接上樣電泳。
成分規(guī)格
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產(chǎn)品名稱 |
規(guī)格 |
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2×Taq PCR MasterMix(含染料) |
1ml/5×1ml |
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2×Taq PCR MasterMix(不含染料) |
1ml/5×1ml |
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20℃可保存12個月 |
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本產(chǎn)品僅供科研使用 ，不得用于其它用途 |
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使用方法
（注 意：以下舉例為常規(guī)PCR體系和反應(yīng)條件，實(shí)際操作中應(yīng)根據(jù)模板、引物結(jié)構(gòu)和目的片段大小不同進(jìn)行相應(yīng)的調(diào)整和優(yōu)化）
1. PCR體系 推薦反應(yīng)體系(20μl)
（注 意：引物濃度請以終濃度 0.1 - 1.0 uM 作為設(shè)定范圍的參考。擴(kuò)增效率不高的情況下，可提高引物的濃度；發(fā)生非特異性反應(yīng)時，可降低引物濃度，由此優(yōu)化反應(yīng)體系）
2. PCR程序
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過程 |
溫度 |
時間 |
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預(yù)變性 |
94℃ |
2min |
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25－35cycles |
變性 |
94℃ |
30sec |
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退火 |
55-65℃ |
30sec |
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延伸 |
72℃ |
1kb/30sec |
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終延伸 |
72℃ |
2min |
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注 意：
A 一般實(shí)驗(yàn)中退火溫度比擴(kuò)增引物的熔解溫度 Tm 低 5℃，無法得到理想的擴(kuò)增效率時，適當(dāng)降低退火溫度；發(fā)生非特異性反應(yīng)時，提高退火溫度，由此優(yōu)化反應(yīng)條件。
B 延伸時間應(yīng)根據(jù)所擴(kuò)增片段大小設(shè)定，Taq DNA Polymerase 的擴(kuò)增效率為1kb/30 sec。
C 可根據(jù)擴(kuò)增產(chǎn)物的下游應(yīng)用設(shè)定循環(huán)數(shù)。如果循環(huán)次數(shù)太少，擴(kuò)增量不足；如果循環(huán)次數(shù)太多，錯配機(jī)率會增加，非特異性背景嚴(yán)重。所以，在保證產(chǎn)物得率的前提下，應(yīng)盡量減少循環(huán)次數(shù)）
3. 結(jié)果檢測
反應(yīng)結(jié)束后取5 μl反應(yīng)產(chǎn)物，加入適量上樣緩沖液（含染料的不用加），然后進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳檢測。