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ELISA試劑盒有什么成功秘笈你知道嗎？
日期：2024-12-23 02:40
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摘要：ELISA試劑盒有什么成功秘笈你知道嗎？
ELISA試劑盒作為經(jīng)典常用的免yi檢測方法，看起來很平常，然而真正做好它并不容易。選擇比較成熟的公司是你不二的選擇。讓通蔚實業(yè)技術(shù)員告訴你ELISA秘笈：
1. 實驗前要準備好相應(yīng)的對比試劑
提前將所有試劑平衡到相應(yīng)的室溫環(huán)境，這個過程需要您的耐心等待。洗液是濃縮液，如有結(jié)晶析出，需完全溶解后再進行稀釋。A、B 兩管顯色底物在使用前15分鐘按 1:1 配成混合液。為保證蛋白標準品溶液配制質(zhì)量。溶解后如需保存，按每次使用量分裝后根據(jù)說明書要求的溫度保存。梯度稀釋蛋白標準品時，建議用聚丙烯管（對蛋白吸附力很低），為了確保梯度的準確性， 每步都要充分混勻且更換新槍頭。
ELISA試劑盒的定量檢測范圍需參考標準曲線，在標準曲線和濃度區(qū)間內(nèi)屬于線性范圍，其中的值是可信和可定量的。濃度高于線性范圍的樣品要稀釋到線性范圍內(nèi)來測量，而濃度低于線性范圍的樣品，其測量值不能用于計算濃度，只能用做參考。有一種常見的相關(guān)情況是：健康人樣本中很多標志物的濃度偏低，測量值低于標準曲線值。
以血清為例，樣本收集需注意以下要點。樣本盡量用無菌管收集，避免xi菌的酶類和代謝產(chǎn)品對結(jié)果的影響。采集過程要避免溶血，因為紅細胞溶解釋放的活性物質(zhì)可能會影響檢測。保存過程中如有沉淀，應(yīng)離心后取上清液。樣本拿到之后應(yīng)立即測定，建議按照說明書的使用量分裝保存在-20℃，每次檢測使用一管，即避免交叉污染和反復凍融，有能保證檢測結(jié)果的平行可比性。
常見樣本類型有血清，血漿，細胞培養(yǎng)上清，如果是廠家實驗驗證過的，可根據(jù)產(chǎn)品說明購買使用?！咀⒁猓貉獫{制備用到的抗凝劑有 EDTA、檸檬酸鹽、肝素等多種，相應(yīng)的血漿性質(zhì)存在差異，需單獨確認兼容性】。
相關(guān)設(shè)備包括移液器、洗板機/搖床和酶標儀。移液器的準確性對于ELISA試劑盒實驗結(jié)果的可靠性十分關(guān)鍵，需要確保定期校準維護。搖床的使用是為了讓反應(yīng)體系快速達到平衡，獲得穩(wěn)定、可重復的結(jié)果。不用搖床對實驗通常的影響是，OD 值低，CV 大。酶標儀等設(shè)備使用前提前 15 分鐘開機預熱。