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必看ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)

日期:2024-12-22 20:27
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摘要:ELSA即酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定,是一類常用的免疫酶技術(shù)。主要方法是將已知的抗原或抗體吸附在固相載體表面,然后利用酶標(biāo)記的抗體或抗原與之孵育,加入顯色劑顯色,通過酶標(biāo)儀測(cè)定待測(cè)物顏色與標(biāo)準(zhǔn)物顏色的差異,繪制出酶活曲線得出待測(cè)物濃度。ELISA可用于測(cè)定抗原,也可用于測(cè)定抗體。 ELISA實(shí)驗(yàn)中有三種必要的試劑: 1、固相的抗原或抗體(用于結(jié)合到固相載體上) 2、標(biāo)記的抗原或抗體(標(biāo)記物) 3、作用的底物(顯色劑,用于顯色) ELISA試劑盒選擇要素: 1、特異性:ELISA試劑盒的特異性于試劑盒的關(guān)鍵組分,抗體對(duì)有關(guān),若抗體對(duì)中為多抗,另一個(gè)必須為單抗,建議使用雙單抗, 2、靈敏度:靈敏度反映的是試劑盒檢出被檢物質(zhì)的低量的能力,用戶可根據(jù)自己樣本中待檢指標(biāo)的量選擇合適的試劑盒,如果待檢指標(biāo)量很低,一般的試劑盒不能滿足要求,可選擇高敏的ELISA試劑盒。 3、重復(fù)性:科學(xué)實(shí)驗(yàn)講求重復(fù)性,一般ELISA試劑盒,期板內(nèi)和板間變異系數(shù)應(yīng)該控制在15%以內(nèi)。 4、簡(jiǎn)便性:試劑盒在保證高質(zhì)量數(shù)據(jù)的情況下,實(shí)驗(yàn)時(shí)間越短,操作越便利,越容易受到用戶歡迎。 ELISA實(shí)驗(yàn)的原理
ELISA試劑盒即酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定,是一類常用的免疫酶技術(shù)。主要方法是將已知的抗原或抗體吸附在固相載體表面,然后利用酶標(biāo)記的抗體或抗原與之孵育,加入顯色劑顯色,通過酶標(biāo)儀測(cè)定待測(cè)物顏色與標(biāo)準(zhǔn)物顏色的差異,繪制出酶活曲線得出待測(cè)物濃度。ELISA可用于測(cè)定抗原,也可用于測(cè)定抗體。

ELISA實(shí)驗(yàn)中有三種必要的試劑:
1、固相的抗原或抗體(用于結(jié)合到固相載體上)
2、標(biāo)記的抗原或抗體(標(biāo)記物)
3、作用的底物(顯色劑,用于顯色)

ELISA試劑盒選擇要素:
1、特異性:ELISA試劑盒的特異性于試劑盒的關(guān)鍵組分,抗體對(duì)有關(guān),若抗體對(duì)中為多抗,另一個(gè)必須為單抗,建議使用雙單抗,
2、靈敏度:靈敏度反映的是試劑盒檢出被檢物質(zhì)的低量的能力,用戶可根據(jù)自己樣本中待檢指標(biāo)的量選擇合適的試劑盒,如果待檢指標(biāo)量很低,一般的試劑盒不能滿足要求,可選擇高敏的ELISA試劑盒。
3、重復(fù)性:科學(xué)實(shí)驗(yàn)講求重復(fù)性,一般ELISA試劑盒,期板內(nèi)和板間變異系數(shù)應(yīng)該控制在15%以內(nèi)。
4、簡(jiǎn)便性:試劑盒在保證高質(zhì)量數(shù)據(jù)的情況下,實(shí)驗(yàn)時(shí)間越短,操作越便利,越容易受到用戶歡迎。

ELISA實(shí)驗(yàn)的原理:
1、包被:抗原或者抗體能以物理性吸附于固相載體表面,原因是蛋白質(zhì)和聚苯乙烯表面間的疏水性部分相互吸附,吸附之后能保持抗原反應(yīng)等免疫活性:
2、標(biāo)記:抗原或者抗體可通過共價(jià)鍵與酶連接成酶結(jié)合物而此種酶結(jié)合物仍能保持其免疫活性和酶的催化特點(diǎn):

3、顯色:酶結(jié)合物與相應(yīng)包被在固相載體的抗原或抗體結(jié)合后,也被固定在固相載體上,加入酶的底物之后可出現(xiàn)顯色反應(yīng),根據(jù)反應(yīng)的顏色深淺可計(jì)算抗原或者抗體的相對(duì)含量。


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