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ELISA試劑盒實驗結(jié)果的準確性
日期：2024-12-22 07:07
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摘要：(1) 固相載體的選擇:許多物質(zhì)可作為固相載體，如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纖維素等。其形試可以是凹孔平板、ELISA試劑盒試管、珠粒等。目前常用的是40孔聚苯乙烯(聚苯乙烯磺酸鈉)凹孔板。不管何種載體，在使用前均可進行篩選:用等量抗原包被，在同一實驗條件下進行反應(yīng)，觀察其顯色反應(yīng)是否均一性，據(jù)此判明其吸附性能是否良好。
(2) 包被抗體(或抗原)的選擇:將抗體(或抗原)吸附在固相載體表面時，要求純度要好,吸附時一般要求PH在9.0~9.6之間。吸附溫度，時間及其蛋白量也有一定影響,一般多采用4C18~24小時。蛋白質(zhì)包被的zui適濃度需進行滴定:即用不同的蛋白質(zhì)濃度(0.1、1.0和10μg/ml等)ELISA試劑盒進行包被后，在其它試驗條件相同時，觀察陽性標本的OD值。對于多數(shù)蛋白質(zhì)來說通常為1~10μg/ml。
(3) 酶標記抗體工作濃度的選擇:首先用直接ELISA試劑盒法進行初步效價的滴定(見酶標記抗體部份)。然后再固定其它條件或采取“方陣法"(包被物、待檢樣品的參考品及酶標記抗體分別為不同的稀釋度)在正式實驗系統(tǒng)里準確地滴定其工作濃度。
在ELISA試劑盒中，進行各項實驗條件的選擇是很重要的，其中包括:
(1) 固相載體的選擇:許多物質(zhì)可作為固相載體，如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纖維素等。其形試可以是凹孔平板、ELISA試劑盒試管、珠粒等。目前常用的是40孔聚苯乙烯(聚苯乙烯磺酸鈉)凹孔板。不管何種載體，在使用前均可進行篩選:用等量抗原包被，在同一實驗條件下進行反應(yīng)，觀察其顯色反應(yīng)是否均一性，據(jù)此判明其吸附性能是否良好。
(2) 包被抗體(或抗原)的選擇:將抗體(或抗原)吸附在固相載體表面時，要求純度要好,吸附時一般要求PH在9.0~9.6之間。吸附溫度，時間及其蛋白量也有一定影響,一般多采用4C18~24小時。蛋白質(zhì)包被的zui適濃度需進行滴定:即用不同的蛋白質(zhì)濃度(0.1、1.0和10μg/ml等)ELISA試劑盒進行包被后，在其它試驗條件相同時，觀察陽性標本的OD值。對于多數(shù)蛋白質(zhì)來說通常為1~10μg/ml。
(3) 酶標記抗體工作濃度的選擇:首先用直接ELISA試劑盒法進行初步效價的滴定(見酶標記抗體部份)。然后再固定其它條件或采取“方陣法"(包被物、待檢樣品的參考品及酶標記抗體分別為不同的稀釋度)在正式實驗系統(tǒng)里準確地滴定其工作濃度。
(1) 固相載體的選擇:許多物質(zhì)可作為固相載體，如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纖維素等。其形試可以是凹孔平板、ELISA試劑盒試管、珠粒等。目前常用的是40孔聚苯乙烯(聚苯乙烯磺酸鈉)凹孔板。不管何種載體，在使用前均可進行篩選:用等量抗原包被，在同一實驗條件下進行反應(yīng)，觀察其顯色反應(yīng)是否均一性，據(jù)此判明其吸附性能是否良好。
(2) 包被抗體(或抗原)的選擇:將抗體(或抗原)吸附在固相載體表面時，要求純度要好,吸附時一般要求PH在9.0~9.6之間。吸附溫度，時間及其蛋白量也有一定影響,一般多采用4C18~24小時。蛋白質(zhì)包被的zui適濃度需進行滴定:即用不同的蛋白質(zhì)濃度(0.1、1.0和10μg/ml等)ELISA試劑盒進行包被后，在其它試驗條件相同時，觀察陽性標本的OD值。對于多數(shù)蛋白質(zhì)來說通常為1~10μg/ml。
(3) 酶標記抗體工作濃度的選擇:首先用直接ELISA試劑盒法進行初步效價的滴定(見酶標記抗體部份)。然后再固定其它條件或采取“方陣法"(包被物、待檢樣品的參考品及酶標記抗體分別為不同的稀釋度)在正式實驗系統(tǒng)里準確地滴定其工作濃度。
(4) 酶的底物及供氫體的選擇:對供氫體的選擇標準是價廉、有明顯地顯色反應(yīng)，而本身無色。有些供氫體(如OPD等)有潛在的致癌作用，應(yīng)注意防護。不致癌、靈敏度高的供氫體，如TMB和ABTS是目前較為滿意的供氫體。底物作用一段時間后，應(yīng)加入強酸或強堿以終止反應(yīng)。通常底物作用時間，以10-30分鐘為宜。ELISA試劑盒底物使用液必須新鮮配制，尤其是H2O2在臨用前加入。
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