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ELISA常見問題
日期：2024-12-22 23:42
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摘要：
ELISA常見問題
1.一次ELISA實驗需要多長時間？
雙抗體夾心ELISA法一次實驗需要3.5-4小時，競爭ELISA法一次實驗需要2-2.5小時。
2.血清樣本如何處理？
全血標(biāo)本于室溫放置2小時或4℃過夜后于1000×g離心20分鐘。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
3. 血漿樣本如何處理？
建議選擇EDTA或者檸檬酸鈉作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，于1000×g離心15分鐘，仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
4.細(xì)胞上清液樣本如何處理？
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ELISA常見問題
1.一次ELISA實驗需要多長時間？
雙抗體夾心ELISA法一次實驗需要3.5-4小時，競爭ELISA法一次實驗需要2-2.5小時。
2.血清樣本如何處理？
全血標(biāo)本于室溫放置2小時或4℃過夜后于1000×g離心20分鐘。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
3. 血漿樣本如何處理？
建議選擇EDTA或者檸檬酸鈉作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，于1000×g離心15分鐘，仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
4.細(xì)胞上清液樣本如何處理？
檢測分泌性的成份時，用無菌管收集。離心20分鐘左右（1000×g）。仔細(xì)收集上清。
5.細(xì)胞裂解液樣本如何處理？
檢測細(xì)胞內(nèi)的成份時，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細(xì)胞懸液，細(xì)胞濃度達(dá)到100萬/ml左右。通過反復(fù)凍融或者超聲破碎，以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心10分鐘左右（5000×g）。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
6.組織樣本如何處理？
用預(yù)冷的PSB (0.01M,pH=7.4)沖洗組織，以去除殘留血液（勻漿中裂解的紅細(xì)胞會影響測量結(jié)果），稱重后將組織剪碎。將剪碎的組織與對應(yīng)體積的PBS（一般按1:9的重量體積比，比如1g的組織樣本對應(yīng)9mL的PBS，具體體積可根據(jù)實驗需要適當(dāng)調(diào)整，并做好記錄。推薦在PBS中加入蛋白酶抑制劑）加入玻璃勻漿器中，于冰上充分研磨。為了進(jìn)一步裂解組織細(xì)胞，可以對勻漿液進(jìn)行超聲破碎，或反復(fù)凍融。后將勻漿液于5000×g 離心5~10分鐘，取上清檢測。
小分子抗原或半抗原因為缺乏可作夾心法的兩個以上的位點，因此不能用雙抗體夾心法進(jìn)行測定，可以采用競爭法。其原理是標(biāo)本中的抗原和固相載體上的抗原競爭生物素化抗體上的結(jié)合位點，標(biāo)本中抗原量含量愈多，結(jié)合在固相上的生物素化抗體愈少，后的顯色也愈淺，即顯色深淺與樣本中的抗原濃度成反比。小分子**等ELISA測定多用此法。
8.用什么軟件處理ELISA檢測的數(shù)據(jù)比較好？
ELISA標(biāo)準(zhǔn)曲線擬合可以應(yīng)用Curve Expert軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。它使用非常方便，可以生成漂亮的曲線應(yīng)用到論文之中。軟件可以在下載中心進(jìn)行下載。ELISA試劑盒
9. 試劑盒做的結(jié)果不理想怎么辦？
實驗結(jié)果不理想請及時與客服或技術(shù)支持聯(lián)系，我們可以幫您一起分析實驗結(jié)果。如果僅憑實驗數(shù)據(jù)無法判斷，您可以將試劑盒發(fā)回給我們進(jìn)行售后檢測。如果是試劑盒本身的質(zhì)量問題，可以為您退換貨；如果是實驗操作的問題，技術(shù)人員可以給您一些改進(jìn)的建議。