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ELISA試劑盒反應(yīng)五要素
日期：2024-12-22 22:45
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摘要：ELISA試劑盒反應(yīng)五要素有哪些？？
ELISA試劑盒反應(yīng)五要素有哪些？
①引物的特異性：引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫(kù)的其它序列無(wú)明顯同源性。
②引物擴(kuò)增跨度： 以200-500bp為宜，特定條件下可擴(kuò)增長(zhǎng)至10kb的片段。
③避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級(jí)結(jié)構(gòu)，ELISA試劑盒避免兩條引物間互補(bǔ)，特別是3'端的互補(bǔ)，否則會(huì)形成引物二聚體，產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。
④引物堿基：G+C含量以40-60%為宜，G+C太少擴(kuò)增效果不佳，G+C過(guò)多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC隨機(jī)分布，避免5個(gè)以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
⑤引物3'端的堿基，特別是末及倒數(shù)第er個(gè)堿基，應(yīng)嚴(yán)格要求配對(duì)，以避免因末端堿基不配對(duì)而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn)， ELISA試劑盒被擴(kuò)增的靶序列有適宜的酶切位點(diǎn)， 這對(duì)酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物長(zhǎng)度： 15-30bp，常用為20bp左右。
