產(chǎn)品中心
文章詳情

蛋白質(zhì)的分離純化的注意事項(xiàng)

日期:2024-12-22 11:24
瀏覽次數(shù):496
摘要:1.為了避免蛋白質(zhì)變性,不要對(duì)樣品劇烈攪動(dòng)和反復(fù)凍融。 2.緩沖溶液成分盡量模擬細(xì)胞內(nèi)環(huán)。。 3.為了避免蛋白質(zhì)的氧化,將0.1~1mmol/LDTT(二硫蘇糖醇)(或β-巰基乙醇)加入到緩沖溶液中。 4.為了避免重金屬對(duì)目標(biāo)蛋白的破壞,將1~10mmol/LEDTA金屬螯合劑加入。 5.為了避免微生物生長(zhǎng),使用清洗溶液。在純化任何一種蛋白質(zhì)的時(shí)候,均必須時(shí)刻對(duì)它的穩(wěn)定性注意維護(hù),使它的活性得到保護(hù),需要牢記如下一些通用的注意事項(xiàng)。 6.盡可能置于冰上或者在冷庫(kù)內(nèi)進(jìn)行操作。 7.蛋白濃度不要太稀。 8.除非是進(jìn)行聚焦層。否則pH需要合適,防止所使用的緩沖溶液pH與pI相同,使蛋白質(zhì)的沉淀得以避免。 9.使用蛋白酶抑制劑,避免蛋白酶對(duì)目標(biāo)蛋白的降解;在純化細(xì)胞中的蛋白質(zhì)時(shí),將DNA酶加入來(lái)使得DNA降解,避免DNA對(duì)蛋白的污染。
蛋白質(zhì)的分離純化在生物化學(xué)研究應(yīng)用中使用廣泛,是一項(xiàng)重要的操作技術(shù)。 一個(gè)典型的真核細(xì)胞可以包含數(shù)以千計(jì)的不同蛋白質(zhì),一些含量十分豐富,一些僅含有幾個(gè)拷貝。為了研究某一個(gè)蛋白質(zhì),必須先將該蛋白質(zhì)從其他蛋白質(zhì)和非蛋白質(zhì)分子中純化出來(lái)。那么純化的時(shí)候需要注意的細(xì)節(jié)是哪些呢?
注意事項(xiàng)
1.為了避免蛋白質(zhì)變性,不要對(duì)樣品劇烈攪動(dòng)和反復(fù)凍融。
2.緩沖溶液成分盡量模擬細(xì)胞內(nèi)環(huán)。。
3.為了避免蛋白質(zhì)的氧化,將0.1~1mmol/LDTT(二硫蘇糖醇)(或β-巰基乙醇)加入到緩沖溶液中。
4.為了避免重金屬對(duì)目標(biāo)蛋白的破壞,將1~10mmol/LEDTA金屬螯合劑加入。
5.為了避免微生物生長(zhǎng),使用清洗溶液。在純化任何一種蛋白質(zhì)的時(shí)候,均必須時(shí)刻對(duì)它的穩(wěn)定性注意維護(hù),使它的活性得到保護(hù),需要牢記如下一些通用的注意事項(xiàng)。
6.盡可能置于冰上或者在冷庫(kù)內(nèi)進(jìn)行操作。
7.蛋白濃度不要太稀。
8.除非是進(jìn)行聚焦層。否則pH需要合適,防止所使用的緩沖溶液pH與pI相同,使蛋白質(zhì)的沉淀得以避免。
9.使用蛋白酶抑制劑,避免蛋白酶對(duì)目標(biāo)蛋白的降解;在純化細(xì)胞中的蛋白質(zhì)時(shí),將DNA酶加入來(lái)使得DNA降解,避免DNA對(duì)蛋白的污染。
上海通蔚生物科技有限公司擁有自己的實(shí)驗(yàn)室,備有業(yè)的技術(shù)研發(fā)團(tuán)隊(duì),長(zhǎng)期致力于各種生物試劑,細(xì)胞,血清,ELISA試劑盒的研發(fā)與銷售,實(shí)驗(yàn)提供免費(fèi)代測(cè)服務(wù),并提供精湛的技術(shù)服務(wù),如果您有實(shí)驗(yàn)上的問(wèn)題歡迎來(lái)咨詢,為您提供業(yè)的一對(duì)一技術(shù)指導(dǎo)。