ELISA實驗加樣時有氣泡的原因和需要注意的細節(jié)

ELISA實驗加樣時通常氣泡都是聚集在酶標板的孔周圍，導致孔中液體不能與孔壁有效接觸，使孔內反應不均一。很多說明書、教科書上也都提到，加樣時要避免出現(xiàn)氣泡，這到底是什么原因呢﹖因為在做實驗的過程中，有時為了打干凈槍頭里面的液體，很容易產生氣泡，是不是這樣對實驗結果會后什么影響?
原因：
1.通常氣泡都是聚集在酶標板的孔周圍，導致孔中液體不能與孔壁有效接觸，使孔內反應不均一。
2.包被時有氣泡的話，將導致包被不完全實際包被里下降―–弱陽性甚至假陰性。
3.封閉時有氣泡的話，將導致大里未結合位點的存在，引起非特異性結合-–本底增高，假陽性。
4.加樣時有氣泡的話，抗原抗體不能有效的結合––弱陽性甚至假陰性。
5.加二抗時有氣泡的話，抗原抗體不能有效的結合––弱陽性甚至假陰性（競爭法相反-—–一假陽性〉。
6.加顯色液時有氣泡的話-—–顯色不完全。
7.加終止液時有氣泡的話（1、不能完全終止反應2、影響酶標儀比色，oD值增高)
8.洗滌時有氣泡的話，非特異性結合物不能完全洗去，做無用功。
注意事項：
精準的儀器和準確的操作是保證ELISA結果準確關鍵，怎樣的加樣方式才是正確呢?ELISA實驗中一般有5次加樣，即加標本、加檢測抗體、加酶結合物和加顯色底物及終止液。
1.實驗室使用的微量加樣器應注意保養(yǎng)并定期校正。ELISA比較敏感，每孔加入液體量誤差會導致結果讀數(shù)差別，因此避免儀器帶來誤差。
2.加樣前，溶液充分混勻，垂直懸空加入液體，避免加在孔壁上，不可產生氣泡。3.加樣時避免液體濺出，如有樣本濺出，應用吸水紙輕輕拭干，并做相應記錄。4.如果加樣槍漏氣以至于加樣的量不夠，不能用槍吸出再加，做相應記錄實驗。5.每次加樣順序一致，尤其底物、終止液順序一致，保證每個孔顯色時間相同。