通蔚生物NADH氧化酶(NOX)測(cè)試盒詳細(xì)介紹

通蔚生物NADH氧化酶(NOX)測(cè)試盒詳細(xì)介紹如下：

測(cè)定意義:
NOX(EC 1.6.99.3)廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中,可在氧氣存在下,直接將NADH氧化為NAD。該酶不僅參與NAD的再生,而且與免疫反應(yīng)密切相關(guān)。
測(cè)定原理:
NOX能夠?qū)ADH氧化為NAD,NADH的氧化與2,6二氯酚靛藍(lán)(DCPIP)的還原相偶聯(lián),藍(lán)色的DCPIP被還原為無(wú)色的DCPIP,在600nm下測(cè)定藍(lán)色DCPIP的還原速率計(jì)算出NADH氧化酶活性的大小。
需自備的儀器和用品:
可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、臺(tái)式離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰、蒸餾水
樣本的前處理:
組織、或細(xì)胞中胞漿蛋白與線粒體蛋白的分離:
①準(zhǔn)確稱取0.1g組織或收集500萬(wàn)細(xì)胞,加入1mL試劑一和10uL 試劑三,用冰浴勻漿器或研缽勻漿。
②將勻漿600g,4℃離心5min。
③棄沉淀,將上清液移至另一離心管中,11100g,4℃離心10min。
④上清液即為除去線粒體的胞漿蛋白,可用于測(cè)定從線粒體泄漏的NOX(此步可選做)。
⑤步驟④中的沉淀即為線粒體,加入200uL試劑二和2uL 試劑三,超聲波破碎(冰浴,功率20%或200W,超聲3s,間隔10秒,重復(fù)30次),用于NOX活性測(cè)定。
血清(漿)樣品:直接檢測(cè)。
上海通蔚生物一直致力于為廣大高校、科研院所和企事業(yè)單位提供NADH氧化酶(NOX)測(cè)試盒科研試劑和完善的技術(shù)服務(wù)，滿足生物化學(xué)、分子生物學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)、免疫學(xué)等生物科技實(shí)驗(yàn)需求。