二磷酸核酮糖羧化酶/加氧酶(Rubisco)測(cè)試盒
測(cè)定方法: 微量法
測(cè)定規(guī)格: 100管/96樣
保存條件: 低溫避光保存
有 效 期: 6個(gè)月
注 意: 正式測(cè)定前務(wù)必取2-3個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定
測(cè)定意義:
二磷酸核酮糖羧化酶(EC 4.1.1.39)是植物光合作用中的一個(gè)關(guān)鍵酶,既控制著CO2的固定,同時(shí)又制約著碳素向Calvin循環(huán)和光呼吸循環(huán)分流,其活性的大小直接影響著光合速率。
測(cè)定原理:
在Rubisco的催化下,1分子的核酮糖-1,5-二磷酸(RuBP)與1分子的CO2結(jié)合,產(chǎn)生2分子的3-磷酸甘油酸(PGA),PGA可通過(guò)外加的3-磷酸甘油酸激酶和甘油醛-3-磷酸脫氫酶的作用,產(chǎn)生甘油醛-3-磷酸,并使還原型輔酶I(NADH)氧化。因此,340nm吸光度的變化可計(jì)算還原型輔酶I氧化速率,還原型輔酶I氧化速率可反應(yīng)Rubisco的活性。
需自備的儀器和用品:
分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、臺(tái)式離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。
粗酶液制備:
①總Rubisco酶提取:建議稱取約0.1g樣本,加入1mL提取液一,冰浴勻漿后超聲破碎(冰浴,200W,破碎3s,間歇7s,總時(shí)間1min),然后4℃,8000g離心10min,取上清測(cè)定。
②胞漿和葉綠體Rubisco酶的分離:按照植物組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g樣本,加入1mL提取液一),冰浴勻漿后于4℃,200g離心5min,棄沉淀,取上清在4℃,8000g離心10min,取上清用于測(cè)定胞漿Rubisco酶活性,取沉淀加1mL提取液二,震蕩溶解后超聲破碎(冰浴,200W,破碎3s,間歇7s,總時(shí)間1min),然后4℃,8000g離心10min,取上清測(cè)定葉綠體中Rubisco酶活性。