雙縮脲法蛋白含量測(cè)試盒
測(cè)定方法: 微量法
測(cè)定規(guī)格: 100T/96S
保存條件: 低溫避光保存
有 效 期: 6個(gè)月
注 意: 正式測(cè)定之前選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測(cè)定,確保蛋白濃度在1~10mg/ml范圍內(nèi)。
測(cè)定意義:
樣品可溶性蛋白質(zhì)含量常常用于酶活性計(jì)算。此外,可溶性蛋白質(zhì)含量也用于食品等質(zhì)量分析。
測(cè)定原理:
強(qiáng)堿性溶液中,雙縮脲與CuSO4形成紫色絡(luò)合物;紫色絡(luò)合物顏色的深淺與蛋白質(zhì)濃度成正比,而與蛋白質(zhì)分子量及氨基酸成分無(wú)關(guān),故可用來(lái)測(cè)定蛋白質(zhì)含量。該方法測(cè)定范圍為1~10mg蛋白質(zhì),適用于蛋白質(zhì)濃度高的樣品,尤其是動(dòng)物材料。
自備儀器和用品:
離心機(jī)、可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔板、移液器和蒸餾水。
樣品中可溶性蛋白質(zhì)提取:
1.液體樣品:澄清無(wú)色液體樣品可以直接測(cè)定。
2.組織樣品:按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱(chēng)取約0.1g組織,加入1mL提取液(自備,根據(jù)需要選用酶提取緩沖液或者蒸餾水或者生理鹽水))
冰浴勻漿,8000g,4℃離心10min,取上清,即待測(cè)液。(動(dòng)物樣品常常需要稀釋)
3.按照細(xì)胞數(shù)量(104個(gè)):提取液體積(mL)為500~1000:1的比例(建議500萬(wàn)細(xì)胞加入1mL提取液),冰浴超聲波破碎細(xì)胞(功率300w,超聲3秒,間隔7秒,總時(shí)間3min);然后8000g,4℃,離心10min,取上清置于冰上待測(cè)。
