編號(hào) |
成分 |
規(guī)格 |
試劑一 |
PCR MagicMix 3.0 |
1 mL(紅蓋) |
試劑二 |
超純水 |
1 mL(亮黃色) |
試劑三 |
白茅根PCR鑒定引物混合液 |
100 μL(白蓋) |
試劑四 |
白茅根PCR鑒定陽性對(duì)照(1×10E8 /μL) |
50 μL(黃蓋) |
試劑五 |
使用手冊(cè) |
1 份 |
白茅根PCR鑒定試劑盒
使用方法 :
一、樣品 DNA 的制備:
1. 用自選方法純化N+2個(gè)樣品的DNA,本試劑盒跟市場上大多數(shù)核酸提取試劑盒兼容。可以選用本公司柱式病毒 DNAout。
2. 如果有N個(gè)樣品,則需要做N+2個(gè)提取,包括一個(gè)樣品制備陽性對(duì)照和一個(gè)樣品制備陰性對(duì)照。樣品制備陽性對(duì)照是在適量水(取決于試劑盒要求的樣品起始量)中加10μL白茅根PCR鑒定陽性對(duì)照的 1000 倍稀釋液而得,樣品制備陰性對(duì)照是直接用水。提取結(jié)束后得到模板 DNA 放冰上待用。
二、設(shè)置 PCR 反應(yīng)(40μL 體系):
3. 對(duì)N+2個(gè)樣品,在PCR時(shí)需要增加一個(gè)PCR陽性對(duì)照和一個(gè)PCR陰性對(duì)照,故需要設(shè)置N+4個(gè)反應(yīng)。在N+4個(gè)PCR管中分別加入下列成分:
成份 |
N+2 個(gè)樣品管 |
PCR 陰性對(duì)照 |
PCR陽性對(duì)照 |
PCR Magic Mix 3.0 |
各 20μL |
20μL |
20μL |
白茅根PCR鑒定引物混合液 |
各 2μL |
2μL |
2μL |
N+2個(gè)樣品DNA模板 |
各18μL |
-- |
-- |
PCR 陰性對(duì)照(水) |
-- |
18μL |
-- |
PCR 陽性對(duì)照(白茅根PCR鑒定陽性對(duì)照1000倍稀釋液) |
-- |
-- |
18μL |
過程 |
溫度 |
時(shí)間 |
預(yù)變性 |
95℃ |
5 min |
PCR 反應(yīng)(35 個(gè)循環(huán)) |
95℃ |
30 sec |
55℃ |
30 sec |
|
72℃ |
40 sec |
|
延伸 |
72℃ |
7 min |