產(chǎn)品及特點(diǎn):
1. 一站式,用戶(hù)不需要單獨(dú)準(zhǔn)備每種成分,包括引物和對(duì)照。
2. 根據(jù)卡薩諾爾森林病病毒的保守基因序列設(shè)計(jì)的引物,具有良好的特異性。
3. 靈敏度可以達(dá)到 1000 拷貝/反應(yīng)。
4. 使用一管式 RT-PCR 技術(shù),RT 和 PCR 兩步在一個(gè)試管內(nèi)完成,不需要中間轉(zhuǎn)移樣品,降低了操作誤差和可能的污染。
5. 本產(chǎn)品足夠 50 次 20μL 體系的 RT-PCR。
6. 本產(chǎn)品只能用于科研,不能用于臨床。
規(guī)格及成分:
編號(hào) |
成分 |
規(guī)格 |
試劑一 |
5×雙酶一管式 RT-PCR Buffer |
200 μL(橘黃蓋) |
試劑二 |
MMLV-Taq Mix |
75 μL(紅蓋) |
試劑三 |
超純水 |
1 mL(亮黃蓋) |
試劑四 |
卡薩諾爾森林病病毒 RT-PCR 引物混合液 |
100 μL(白蓋) |
試劑五 |
卡薩諾爾森林病病毒 RT-PCR 陽(yáng)性對(duì)照(1×10E8 /μL) |
50 μL(黃蓋) |
試劑六 |
使用手冊(cè) |
1 份 |
運(yùn)輸及保存:
低溫運(yùn)輸,-20℃保存,保存期限為 12 個(gè)月。收到貨后陽(yáng)性對(duì)照需要跟其他成分分開(kāi)放置,因?yàn)槠淙菀孜廴酒渌煞郑斐杉訇?yáng)性。
自備試劑:
樣品 RNA。
卡薩諾爾森林病病毒RT-PCR試劑盒
使用方法:
一、樣品 DNA 的制備:
1. 如果有 N 個(gè)樣品,必須設(shè)置 N+2 個(gè)提取,多出的一個(gè)是 PC(樣品制備陽(yáng)性對(duì)照),一個(gè)是NC(樣品制備陰性對(duì)照)??梢杂?10μL 卡薩諾爾森林病病毒 PCR陽(yáng)性對(duì)照的 1000 倍稀釋液作為制備的陽(yáng)性對(duì)照??梢杂盟鳛橹苽涞年幮詫?duì)照。制備所得成為樣品 RNA。
2. 用自選方法純化 N+2 個(gè)樣品的 RNA,本試劑盒跟市場(chǎng)上大多數(shù)病毒 RNA 提取試劑盒兼容。可以選購(gòu)本公司的柱式病毒 RNAout。
二、設(shè)置RT- PCR 反應(yīng)(20μL 體系):
3. 如果有 N+2 個(gè)樣品,則標(biāo)記 N+4 個(gè) PCR 管(額外增加的兩個(gè)管一個(gè)是RT-PCR 陽(yáng)性對(duì)照,另一個(gè)是 RT-PCR 陰性對(duì)照)并按照下表在 PCR 管中加入下列成分:
成份 |
N+2 個(gè) 樣品管 |
RT-PCR 陰性對(duì)照 |
RT-PCR 陽(yáng)性對(duì)照 |
5×雙酶一管式RT-PCR Buffer |
各 4 μL |
4 μL |
4 μL |
卡薩諾爾森林病病毒 RT-PCR 引物混合液 |
各 2 μL |
2μL |
2μL |
N+2 個(gè)制備的 RNA 樣品 |
各 12.5μL |
-- |
-- |
超純水 |
-- |
12.5μL |
-- |
卡薩諾爾森林病病毒 RT-PCR 陽(yáng)性對(duì)照的 1000倍稀釋液 |
-- |
-- |
12.5μL |
MMLV-Taq Mix |
1.5 μL |
1.5 μL |
1.5 μL |
過(guò)程 |
溫度 |
時(shí)間 |
逆轉(zhuǎn)錄 |
42℃ |
30 min |
預(yù)變性 |
95℃ |
5 min |
PCR 反應(yīng)35個(gè)循環(huán) |
95℃ |
30 sec |
58℃ |
30 sec |
|
72℃ |
20 sec |
|
延伸 |
72℃ |
7 min |
5. 瓊脂糖電泳檢測(cè)擴(kuò)增效果。如果陰性對(duì)照有擴(kuò)增產(chǎn)物或陽(yáng)性對(duì)照無(wú)擴(kuò)增產(chǎn)物,則說(shuō)明實(shí)驗(yàn)失敗,需要分析實(shí)驗(yàn)失敗的原因。只有在陰性對(duì)照沒(méi)有擴(kuò)增產(chǎn)物、陽(yáng)性對(duì)照必須有預(yù)期條帶出現(xiàn),才有必要分析樣品的實(shí)驗(yàn)結(jié)果,如果有預(yù)期片段大小的擴(kuò)增產(chǎn)物則為陽(yáng)性,如果無(wú)則為陰性。