產(chǎn)品詳情
簡(jiǎn)單介紹：
血液基因組DNA大量提取試劑盒(1-20ML)本試劑盒適用于各種新鮮及抗凝劑（檸檬酸鈉、EDTA 等）處理過(guò)的全血基因組 DNA 大量提取。DNA 特異吸附到硅膠膜上，通過(guò)簡(jiǎn)單漂洗去除雜質(zhì)，可快速純化得到基因組 DNA 。使用本試劑盒得到的血液基因組 DNA 無(wú)蛋白、核酸酶污染，可直接進(jìn)行 PCR 、 酶切和雜交等分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)。
詳情介紹：
產(chǎn)品及特點(diǎn)
本試劑盒適用于各種新鮮及抗凝劑（檸檬酸鈉、EDTA 等）處理過(guò)的全血基因組 DNA 大量提取。DNA 特異吸附到硅膠膜上，通過(guò)簡(jiǎn)單漂洗去除雜質(zhì)，可快速純化得到基因組 DNA 。使用本試劑盒得到的血液基因組 DNA 無(wú)蛋白、核酸酶污染，可直接進(jìn)行 PCR 、 酶切和雜交等分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)。
它具有下列特點(diǎn)：
它具有下列特點(diǎn)：
1. 操作簡(jiǎn)便：無(wú)需有機(jī)試劑沉淀，可快速獲得高純度的血液基因組 DNA；
2. 純度高：去除污染物和抑制劑徹底，便于下游應(yīng)用。
成分規(guī)格
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Buffer GTL |
110ml |
550ml |
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Buffer GL |
110ml |
550ml |
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10×紅細(xì)胞裂解液 RBL |
50ml |
250ml |
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Buffer EB |
10ml |
50ml |
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Buffer W1（concentrate） |
26ml |
2×52ml |
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Buffer W2（concentrate） |
60ml |
4×60ml |
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Proteinase K |
2×1ml |
10×1ml |
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Spin Columnwith Collection Tubes |
10套 |
50套 |
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蛋白酶K 于-20℃, 其他組分室溫（15 - 25℃),可保存 12 個(gè)月 |
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本產(chǎn)品僅供科研使用，不得用于其它用途 |
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使用方法
自備試劑
無(wú)水乙醇、RNase A（可選）。
（注 意：a.使用前請(qǐng)先在緩沖液 Buffer W1 和 Buffer W2 中加入無(wú)水乙醇，加入體積請(qǐng)參照瓶上的標(biāo) 簽; b.把 10×紅細(xì)胞裂解液 RBL 稀釋成 1×工作液）
1. 處理樣品：取 10-20 ml 全血于 50 ml 離心管中，加入 1.5 倍體積細(xì)胞裂解液 RBL 顛倒混勻 10 次，5,000 rpm 離心 3 min ，倒棄上清；重復(fù) 1-2 次，直到紅細(xì)胞充分裂解；
（注 意：細(xì)胞裂解液 RBL 處理步驟應(yīng)小心操作，為避免沉淀被倒出，推薦使用尖底離心管。在極少 的情況下細(xì)胞裂解液 RBL 處理得到的沉淀可能會(huì)很松弛，所以要緩慢倒上清。）
2. 加入 200ul Proteinase K 和 10 ml 緩沖液 GTL，立即上下劇烈震蕩或渦旋混勻至溶液混 合均勻。
3. 加入 10ml Buffer GL 渦旋混勻。
4. 56℃水浴 10-30 min。每隔 3 min 振蕩一次，以助裂解，如遇特殊樣本，未能很好裂解， 請(qǐng)適當(dāng)延長(zhǎng)孵育時(shí)間。
5. 加入 20 ml 無(wú)水乙醇，充分震蕩，短暫離心以去除管蓋內(nèi)壁液體。
6. 將吸附柱放入收集管，將上一步所得溶液分次加入吸附柱中，10,000 rpm 離心 1 min， 棄收集管中濾液。
7. 向吸附柱內(nèi)加入 10 ml Buffer W1 ，室溫 10,000 rpm 離心 1 min ，棄收集管中濾液。
（注 意：按要求在 Buffer W1 中加入無(wú)水乙醇，用后及時(shí)蓋緊， 以防乙醇揮發(fā)）
8. 向吸附柱內(nèi)加入 10 ml Buffer W2 ，室溫 10,000 rpm 離心1min ，棄收集管中濾液。
（注 意：Buffer W2 是濃縮液，按要求加入無(wú)水乙醇，用后及時(shí)蓋緊， 以防乙醇揮發(fā)）
9. 向吸附柱內(nèi)加入 5 ml Buffer W2 ，室溫 10,000 rpm 離心10 min ，棄收集管中廢液。
（注 意：此步不能省略，否則殘留乙醇會(huì)影響基因組 DNA 的后續(xù)使用）
10. 將離心吸附柱置于一個(gè)新的 15 ml 塑料離心管（自備）中，開(kāi)蓋于空氣中 5min ，加入 300-1000 ul Buffer EB，室溫放置 5 min ，10,000 rpm 離心 2 min，離心管底溶液即基因 組 DNA。
（注 意：為增加洗脫效率，可將洗脫液 Buffer EB 在 60℃預(yù)熱。如需使用去離子水洗脫，可用 NaOH 調(diào)整其pH 值在7.0 - 8.5 之間，為了增加回收率，可將得到的溶液重新加入到吸附柱中，室溫放置2 min， 再次離心收集）
注意事項(xiàng)
1. 如 Buffer GTL產(chǎn)生沉淀，可在 56℃水浴溶解。
2. 樣品應(yīng)避免反復(fù)凍融，否則會(huì)導(dǎo)致提取的 DNA 片段小，提取量下降。
3. 所有離心步驟均為臺(tái)式離心機(jī)，室溫下操作。
4. 按要求在 Buffer W1 和 Buffer W2 中加入無(wú)水乙醇。
