產(chǎn)品詳情
簡單介紹：
SPEEDYPURE快速質粒小提中量試劑盒本試劑盒用于質粒 DNA 的小量快速制備。在經(jīng)典堿裂解法提取質粒的基礎上進行改 進優(yōu)化，可視化操作，可在 10 min 之內完成提取任務，大大降低了提取時間。質?？蓮?菌體中快速釋放，并特異、高效地被離心吸附柱吸附。所得質粒可直接用于酶切、轉化、 PCR 、實時熒光定量，測序等各種分子生物學實驗。
詳情介紹：
產(chǎn)品及特點
本試劑盒用于質粒 DNA 的小量快速制備。在經(jīng)典堿裂解法提取質粒的基礎上進行改 進優(yōu)化，可視化操作，可在 10 min 之內完成提取任務，大大降低了提取時間。質?？蓮?菌體中快速釋放，并特異、高效地被離心吸附柱吸附。所得質?？芍苯佑糜诿盖小⑥D化、 PCR 、實時熒光定量，測序等各種分子生物學實驗。
它具有下列特點：
它具有下列特點：
1. 快捷、高效：可視化操作，簡便高效，節(jié)約時間；
2. 純度高：沉淀致密，去雜干凈。
成分規(guī)格
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Buffer S1（紫紅色） |
30ml |
60ml |
120ml |
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Buffer EB |
10ml |
30ml |
60ml |
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Buffer S2 |
30ml |
60ml |
120ml |
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Buffer S5 |
30ml |
60ml |
120ml |
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Buffer W2（concentrate） |
15ml |
30ml |
60ml |
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RNase A (10 mg/ml) |
300μl |
600μl |
1.2ml |
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Spin Column with Collection Tubes |
50套 |
100套 |
200套 |
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注意：使用前將全部 RNase A 溶液加到 Buffer S1中混合均勻，2 - 8℃保存 ; 按要求在 Buffer W2 中加入無水乙醇 |
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本產(chǎn)品僅供科研使用，不得用于其它用途 |
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保存條件
在室溫(15-25℃)干燥條件下，可保存 12 個月；更長時間的保存可置于 2-8℃ 。若溶 液產(chǎn)生沉淀，應在使用前置于37℃下溶解沉淀。加入 RNase A 后的 Buffer S1 應置于 2-8℃ 保存，可穩(wěn)定保存 6 個月。
使用方法
使用方法
1. 取 5-10 ml 過夜培養(yǎng)的菌液，室溫 12,000 rpm 離心 1 min，盡量將上清去除干凈。（注 意：根據(jù)菌液的濃度決定取液量，濃度高時取 5 ml 菌液離心即可，濃度低時可多收集一次）
2. 加入 500 μl Buffer S1，旋渦震蕩或用移液器充分吹打使菌體重懸均勻，呈現(xiàn)出均勻混濁的棕紅色。
（注 意：菌體沉淀一定要懸浮均勻，如有未徹底懸浮的菌塊會影響裂解，導致提取的質粒濃度及純度降低）
3. 加入 500 μl Buffer S2，溫和顛倒混勻使菌體完全裂解，直到溶液變成清亮、粘稠的紫紅色。
（注 意：不可劇烈震蕩，以免造成基因組 DNA 片段的污染）
4. 加入 500 μl Buffer S5，立即溫和顛倒混勻，可見紅黃相間的沉淀物產(chǎn)生，繼續(xù)混勻直到完全變?yōu)辄S色，然后 12,000 rpm 離心 3 min。
（注 意：Buffer S5 加入后應立即混合，避免產(chǎn)生局部沉淀，如果上清中還有紫色漂浮物，說明復性不充分，繼續(xù)混勻至溶液顏色完全變?yōu)槌吻宓狞S色）
5. 小心將上清液轉移到離心吸附柱中，12,000 rpm 離心 0.5min，棄收集管中濾液；吸附柱的容量是 750μl，要分 2 次轉入。
6. 加入 600 μl Buffer W2，室溫 12,000 rpm 離心 2 min，棄收集管中濾液。
（注 意：Buffer W2 為濃縮液，按要求加入無水乙醇，用后應立即蓋緊瓶蓋，以防酒精揮發(fā)）
7. 將吸附柱置于一新的無菌1.5 ml離心管（自備）中，加入100-300 μl的洗脫液Buffer EB，室溫 12,000 rpm 離心 1 min，離心管底溶液即質粒 DNA。
注意事項
1. xi菌培養(yǎng)時間一般為12 -16小時，如接種量大則應減少培養(yǎng)時間，過度培養(yǎng)會降低質粒質量甚至導致質粒DNA突變。
2. 每次使用時都要注意 Buffer S2 和 S5 是否形成沉淀，如有沉淀37℃溶解后再用。
3. 質粒的產(chǎn)量跟xi菌量、質?？截悢?shù)、質粒大小和操作規(guī)范程度密切相關，一般1.5 ml 過 夜培養(yǎng)菌體可收獲約10μg高拷貝質粒。
4. 吸附柱的吸附量為 70μl，要獲得更多的質粒請分多次提取或用質粒大提試劑盒。
