產(chǎn)品中心
產(chǎn)品詳情

  • 產(chǎn)品名稱：快速高保真DNA聚合酶(突變型)

  • 產(chǎn)品型號(hào)： 500 U,2.5 U/ul
  • 產(chǎn)品廠商：通蔚生物
  • 產(chǎn)品價(jià)格：1380
  • 產(chǎn)品庫(kù)存：122
  • 產(chǎn)品文檔：
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簡(jiǎn)單介紹：
快速高保真 DNA 聚合酶（突變型）是從克隆有 Pfu DNA Polymerase 基因的大腸桿菌經(jīng)誘導(dǎo)表達(dá)后分離純化的，該酶融合了 sso7d 序列，該酶在保證高保真性前提下，大大增強(qiáng)擴(kuò)增的速度。在 PCR 反應(yīng)中，該酶延伸速度為 1 kb/10-15s，較適合小于2kb以下片段的擴(kuò)增，具有 5’-3’DNA 聚合酶活性和 3’-5’外切核酸酶活性，產(chǎn)物3’端不帶A，不能直接用 TA 載體克隆。 一般用于 DNA 片段的 PCR 擴(kuò)增、DNA 標(biāo)記、引物延伸、序列測(cè)定等，產(chǎn)物不能直接用于 T/A 載體克隆。
詳情介紹：
產(chǎn)品特點(diǎn)
快速高保真 DNA 聚合酶（突變型）是從克隆有 Pfu DNA Polymerase 基因的大腸桿菌經(jīng)誘導(dǎo)表達(dá)后分離純化的，該酶融合了 sso7d 序列，該酶在保證高保真性前提下，大大增強(qiáng)擴(kuò)增的速度。在 PCR 反應(yīng)中，該酶延伸速度為 1 kb/10-15s，較適合小于2kb以下片段的擴(kuò)增，具有 5’-3’DNA 聚合酶活性和 3’-5’外切核酸酶活性，產(chǎn)物3’端不帶A，不能直接用 TA 載體克隆。 一般用于 DNA 片段的 PCR 擴(kuò)增、DNA 標(biāo)記、引物延伸、序列測(cè)定等，產(chǎn)物不能直接用于 T/A 載體克隆。

成分規(guī)格

產(chǎn)品組成

規(guī)格

快速高保真 DNA 聚合酶(突變型)

200μl / 500Ｕ/ 2.5U/μl

10×快速高保真 Buffer

2×1ml

-20℃，有效期 1 年

本產(chǎn)品僅供科研使用　，不得用于其它用途


使用方法
注 意：以下舉例為常規(guī)PCR反應(yīng)體系和反應(yīng)條件，實(shí)際操作中應(yīng)根據(jù)模板、引物結(jié)構(gòu)和目的片段大小不同進(jìn)行相應(yīng)的調(diào)整和優(yōu)化）
1. PCR 體系：
推薦體系（50μl）

試劑

用量

模板 DNA

< 1μg

10×快速高保真Buffer

5μl

dNTP Mixture(2.5 mM each)

4μl

Primer 1 (10 μM)

2μl

Primer 2 (10 μM)

2μl

快速高保真 DNA 聚合酶（突變型）

0.5 ~ 1μl

ddH2O

Up to 50μl

2. PCR 程序

過(guò)程

溫度

時(shí)間

預(yù)變性

94℃

5min

25－35cycles

變性

94℃

30sec

退火

55－65℃

30sec

延伸

72℃

1kb/15sec

終延伸

72℃

5min


注 意：
a 一般實(shí)驗(yàn)中退火溫度比擴(kuò)增引物的熔解溫度 Tm 相當(dāng)，無(wú)法得到理想的擴(kuò)增效率時(shí)，適當(dāng)降低退火溫度；發(fā)生非特異性反應(yīng)時(shí)，提高退火溫度，由此優(yōu)化反應(yīng)條件。
3. 結(jié)果檢測(cè)：
反應(yīng)結(jié)束后取 5 μl 反應(yīng)產(chǎn)物，加入適量上樣緩沖液后進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)。
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