產(chǎn)品中心
產(chǎn)品詳情

  • 產(chǎn)品名稱：免提取pcr直接擴增試劑盒

  • 產(chǎn)品型號： 400T
  • 產(chǎn)品廠商：通蔚生物
  • 產(chǎn)品價格：552
  • 產(chǎn)品庫存：125
  • 產(chǎn)品文檔：
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簡單介紹：
免提取pcr直接擴增試劑盒本產(chǎn)品專用于從各種常見的生物樣品中快速釋放DNA，并進行PCR擴增。
詳情介紹：

產(chǎn)品特點
本產(chǎn)品專用于從各種常見的生物樣品中快速釋放DNA，并進行PCR擴增。

它具有下列特點：
1. 操作簡便，用時短，約5-10分鐘即可以得到用于核酸擴增的DNA模板，無需提取純化步驟。
2. PCR擴增試劑包含Taq DNA聚合酶、dNTPs、MgCl2、反應(yīng)緩沖液、PCR反應(yīng)增強劑、優(yōu)化劑以及穩(wěn)定劑，濃度為2×。具有快速簡便、靈敏度高、特異性強、穩(wěn)定性好等優(yōu)點。
3.可以用于幾乎所有的生物樣品包括細-菌、昆蟲、真-菌、各種植物、各種動物、法醫(yī)樣品（包括全血液、血痕、精斑、唾液、毛發(fā)、組織樣品、口腔細胞和FTA卡）石蠟組織切片等。
4. 在 PCR 結(jié)束后可以直接上樣電泳。
5. 不含任何有毒有害的試劑。
6. 本產(chǎn)品可處理 400 份樣品，進行 400 次 20μl 的 PCR 擴增。

成分規(guī)格

組成

名稱

規(guī)格

組分一

核酸釋放劑

20ml

組分二

2×PCR MasterMix

4×1ml

核酸釋放劑可常溫放置，2×PCR MasterMix 需要在-20℃保存，有效期12個月

本產(chǎn)品僅供科研使用 ，不得用于其它用途


使用方法
(一）DNA釋放－液體樣品
1. 將約 2 μL 液體樣品（如全血、細胞培養(yǎng)液、病毒樣品、糞便樣品）加入到50μL核酸釋放劑中。
注 意：總液體樣品用量不要超過本產(chǎn)品用量的1/10
2. 室溫放置3分鐘；對于較難裂解的樣品（如有厚壁的真-菌等），則保溫時間可以延長到 10-30分鐘。
3. 簡短振蕩混勻后取樣品裂解液直接進行PCR擴增。

組織樣品
1. 將 2 mg 左右的固體樣品（如動物組織、植物葉片、種子等）加入到50 μL核酸釋放劑中。
注 意：總樣品量不要超過 1 mg/10μL的比例。
2. 95℃加熱 5 分鐘；對于較難裂解的樣品（如石蠟組織切片、血斑等），則保溫時間可以延長到 10-30 分鐘。
3. 簡短振蕩混勻后取樣品裂解液直接進行 PCR 擴增。

(二）PCR 擴增
注 意：以下舉例為常規(guī)PCR體系和反應(yīng)條件，實際操作中應(yīng)根據(jù)模板、引物結(jié)構(gòu)和目的片段大小不同進行相應(yīng)的調(diào)整和優(yōu)化）
1. PCR體系推薦反應(yīng)體系（20μl）
注 意：
裂解液體積不要超過反應(yīng)體積的 1/10，對 20μL 的擴增體系，加入的裂解液不要超過2μL。引物濃度請以終濃度 0.1 - 1.0 uM 作為設(shè)定范圍的參考。擴增效率不高的情況下，可提高引物的濃度；發(fā)生非特異性反應(yīng)時，可降低引物濃度，由此優(yōu)化反應(yīng)體系。

試劑

用量

樣品裂解液

< 2 μl

Primer F (10μM)

0.5μl

Primer R (10μM)

0.5μl

2×PCR MasterMix

10μl

ddH2O

Up to 20μl

2. PCR 程序

過程

溫度

時間

預(yù)變性

94℃

2min

25-35cycles

變性

94℃

30sec

退火

55-65℃

30sec

延伸

72℃

1kb/30sec

終延伸

72℃

2min


注 意：
A. 一般實驗中退火溫度比擴增引物的熔解溫度 Tm 低 5℃，無法得到理想的擴增效率時，適當降低退火溫度；發(fā)生非特異性反應(yīng)時，提高退火溫度，由此優(yōu)化反應(yīng)條件。
B. 延伸時間應(yīng)根據(jù)所擴增片段大小設(shè)定，Taq DNA Polymerase 的擴增效率為1kb/30 sec。
C. 可根據(jù)擴增產(chǎn)物的下游應(yīng)用設(shè)定循環(huán)數(shù)。如果循環(huán)次數(shù)太少，擴增量不足；如果循環(huán)次數(shù)太多，錯配機率會增加，非特異性背景嚴重。所以，在保證產(chǎn)物得率的前提下，應(yīng)盡量減少循環(huán)次數(shù)
3. 結(jié)果檢測
反應(yīng)結(jié)束后取5 μl反應(yīng)產(chǎn)物，然后進行瓊脂糖凝膠電泳檢測。
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