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兔抗多克隆抗體效價檢測說明
日期：2024-12-22 15:09
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摘要：
兔抗多克隆抗體效價檢測：
1、2個參照:陰性參照為預(yù)取血血清，均以1抗起始濃度稀釋(封閉稀釋液);陽性參照為以前陽性血清
2、于96孔板中每孔滴加100ul，1ug/ml抗原，于4℃過夜，也可以37℃孵育2小時。
3、倒掉抗原溶液，每孔加入200ul的封閉液，4℃過夜或者37℃孵育2小時。
4、倒去封閉液，在吸水紙上拍打盡量吸干殘留液體,用洗滌液洗板三次,每次盡量拍干殘留液體,若要放置一段時間, 37℃烘干并用封口袋封好于-20℃存放。
5、取包被好的96孔板，**孔加入陰性參照液100ul，**孔加入陽性參照液100ul，第三孔加入1:500的待測抗血清，后續(xù)各孔在此基礎(chǔ)上倍比稀釋，于37℃孵育1 小時。
6、倒掉液體，用洗滌液洗板三次，拍干。每孔加入100ul的HRP標記的小鼠抗兔IgG（1：2000稀釋），于37℃孵育45分鐘。
7、倒掉液體，用洗滌液洗板三次，拍干。每孔加入100ul的TMB底物（Sigma 單組份TMB ）37℃孵育5—20分鐘(根據(jù)顏色深淺來決定顯色的時間)。
8、每孔加入50ul的終止液（2N H2SO4），在酶標儀上讀取波長450nm處的吸光值。
抗體效價檢測達到1萬以上后可以對兔子進行終放血。