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ELISA實(shí)驗(yàn)過程中處理血清樣本的注意事項(xiàng)

日期:2024-12-22 16:15
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摘要:在ELISA實(shí)驗(yàn)中,血清是極為常見的樣本,那么在ELISA實(shí)驗(yàn)過程中處理血清樣本時(shí)有哪些注意事項(xiàng)呢?今天就跟大家來介紹一下。 1、要注意避免出現(xiàn)嚴(yán)重溶血。血紅蛋白中含有血紅素基團(tuán),其有類似過氧化物的活性,因此,在以HRP為標(biāo)記酶的ELISA測(cè)定中,如血清樣本中血紅蛋白濃度較高,則其就很容易在溫育過程中吸附于固相,從而與后面加入的HRP底物反應(yīng)顯色。 2、樣本的采集及血清分離中要注意盡量避免菌體污染,一則菌體?的生長(zhǎng),其所分泌的一些酶可能會(huì)對(duì)抗原抗體等蛋白產(chǎn)生分解作用;二則一些菌體?的內(nèi)源性酶如大腸桿菌的β-半乳糖苷酶本身會(huì)對(duì)用相應(yīng)酶作標(biāo)記的測(cè)定方法產(chǎn)生非特異性干擾。 3、血清樣本如是以無菌操作分離,則可以在2~8℃下保存一周,如為有菌操作,則建議冰凍保存。樣本的長(zhǎng)時(shí)間保存,應(yīng)在-70℃以下。 4、冰凍保存的血清樣本須注意避免因停電等造成的反復(fù)凍融。樣本的反復(fù)凍融所產(chǎn)生的機(jī)械剪切力將對(duì)標(biāo)本中的蛋白等分子產(chǎn)生破壞作用,從而引起假陰性結(jié)果。此外,凍融樣本的混勻亦應(yīng)注意,不要進(jìn)行劇烈振蕩,反復(fù)顛倒混勻即可。 5、樣本在保存中如出現(xiàn)菌體?污染所致的混濁或絮狀物時(shí),應(yīng)
ELISA實(shí)驗(yàn)中,血清是極為常見的樣本,那么在ELISA實(shí)驗(yàn)過程中處理血清樣本時(shí)有哪些注意事項(xiàng)呢?今天就跟大家來介紹一下。

1、要注意避免出現(xiàn)嚴(yán)重溶血。血紅蛋白中含有血紅素基團(tuán),其有類似過氧化物的活性,因此,在以HRP為標(biāo)記酶的ELISA測(cè)定中,如血清樣本中血紅蛋白濃度較高,則其就很容易在溫育過程中吸附于固相,從而與后面加入的HRP底物反應(yīng)顯色。

2、樣本的采集及血清分離中要注意盡量避免菌體污染,一則菌體的生長(zhǎng),其所分泌的一些酶可能會(huì)對(duì)抗原抗體等蛋白產(chǎn)生分解作用;二則一些菌的內(nèi)源性酶如大腸桿菌的β-半乳糖苷酶本身會(huì)對(duì)用相應(yīng)酶作標(biāo)記的測(cè)定方法產(chǎn)生非特異性干擾。

3、血清樣本如是以無菌操作分離,則可以在2~8℃下保存一周,如為有菌操作,則建議冰凍保存。樣本的長(zhǎng)時(shí)間保存,應(yīng)在-70℃以下。

4、冰凍保存的血清樣本須注意避免因停電等造成的反復(fù)凍融。樣本的反復(fù)凍融所產(chǎn)生的機(jī)械剪切力將對(duì)標(biāo)本中的蛋白等分子產(chǎn)生破壞作用,從而引起假陰性結(jié)果。此外,凍融樣本的混勻亦應(yīng)注意,不要進(jìn)行劇烈振蕩,反復(fù)顛倒混勻即可。

5、樣本在保存中如出現(xiàn)菌污染所致的混濁或絮狀物時(shí),應(yīng)離心沉淀后取上清檢測(cè)。

以上就是ELISA實(shí)驗(yàn)過程中處理血清樣本的注意事項(xiàng),處理好實(shí)驗(yàn)樣本是能順利進(jìn)行實(shí)驗(yàn)的前提,所以大家在一定要多加注意。