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選擇適合的ELISA試劑盒要考慮哪些參數(shù)呢

日期：2024-12-22 22:53
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摘要：選擇適合的ELISA試劑盒要考慮哪些參數(shù)呢
如有需要選合適的ELISA試劑盒，首先我們需要仔細(xì)評(píng)估檢測(cè)性能。重要參數(shù)包括靈敏度、動(dòng)態(tài)范圍以及精度，這些在多數(shù)的ELISA試劑盒都有報(bào)告。對(duì)于典型樣品類型而言，其它參數(shù)對(duì)ELISA性能更具預(yù)測(cè)價(jià)值。回收率(%)及稀釋線性測(cè)量實(shí)際樣品中的靶蛋白，這些實(shí)際樣品包括血漿、血清或細(xì)胞培養(yǎng)基。本期內(nèi)容旨在告訴您如何解讀不同參數(shù)，以幫助您的樣品找到zui合適的 ELISA試劑盒。選擇ELISA試劑盒時(shí)需要注意的參數(shù)匯總：

具體參數(shù)如下：

參數(shù) 靈敏度  動(dòng)態(tài)范圍  批內(nèi)精度 CV (%)  批間精度 CV (%)  特異性  回收率 (%)  稀釋線性
讓我們來了解靈敏度  動(dòng)態(tài)范圍 特異性  回收率 (%)  稀釋線性

一：ELISA試劑盒的靈敏度

靈敏度是ELISA試劑盒抗體對(duì)可檢測(cè)的zui低蛋白水平。

二：ELISA試劑盒的動(dòng)態(tài)范圍

動(dòng)態(tài)范圍是檢測(cè)可準(zhǔn)確量化的靶蛋白高濃度到低濃度區(qū)間。了解樣品中預(yù)計(jì)的靶蛋白水平非常重要，這可以幫助檢查給定的 ELISA 試劑盒靈敏度及動(dòng)態(tài)范圍是否合適。如果樣品靶蛋白濃度很高，可以對(duì)樣品進(jìn)行稀釋，以確保原始信號(hào)在測(cè)定的動(dòng)態(tài)范圍之內(nèi)。當(dāng)檢測(cè)實(shí)驗(yàn)中有兩個(gè)參數(shù)時(shí)，簡(jiǎn)單的用標(biāo)準(zhǔn)蛋白來測(cè)定濃度往往會(huì)不準(zhǔn)確。因?yàn)檫@很可能無法反應(yīng)出樣本中內(nèi)源蛋白的動(dòng)態(tài)變化。


三：ELISA試劑盒的特異性

確保ELISA試劑盒使用的抗體不與非靶蛋白進(jìn)行交叉反應(yīng)，這點(diǎn)非常重要。這些可能是不同物種間的高同源性蛋白。比如，人體因子 IX SimpleStep ELISA? 試劑盒(ab188393)特異于人體因子 IX 且不與小鼠、大鼠、兔子、山羊、豚鼠、倉(cāng)鼠、牛、狗或豬樣本發(fā)生反應(yīng)。


選擇適合的ELISA試劑盒要考慮哪些參數(shù)呢


四：ELISA試劑盒的回收率

回收率(%)是通過給一份生物樣品類型（同時(shí)也稱樣品基質(zhì)）里加入已知數(shù)量的純化靶蛋白而確定的。對(duì)于分泌蛋白，比如細(xì)胞因子，常見的樣品基質(zhì)有血漿及血清；對(duì)于細(xì)胞內(nèi)蛋白，比如激酶，樣品是細(xì)胞培養(yǎng)裂解物。測(cè)量ELISA中的加標(biāo)樣品，并通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算濃度。將計(jì)算的濃度與已知的蛋白濃度進(jìn)行比較，以百分比的形式呈現(xiàn)。比如，100% 回收率表示觀察濃度與樣品里加標(biāo)蛋白的實(shí)際濃度一致。這表明同一樣品類型中的其它蛋白及分子并未干擾靶蛋白的量化。如果對(duì)于某一特定樣品類型，回收率測(cè)量值小于 80%，則需要選取另一套不同的 ELISA 試劑盒以供量化。


五：ELISA試劑盒的稀釋線性
稀釋線性與回收率彼此相輔相成，因?yàn)樗饕獪y(cè)量了生物樣品里的天然蛋白，而非加標(biāo)蛋白。稀釋線性是根據(jù)ELISA測(cè)量的已知陽(yáng)性樣品中的不同稀釋度來確定的。靶蛋白濃度通過將稀釋因子乘以計(jì)算所得濃度來確定。為獲取zui佳結(jié)果，所有稀釋液的樣品濃度都應(yīng)保持一致。如果發(fā)現(xiàn)與未稀釋樣品的差異超過20%，則需要選取其它ELISA試劑盒來做精準(zhǔn)定量。